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人水痘帶狀皰疹病毒IgG(VZV-IgG)ELISA試劑盒
更新時間:2014-10-08   點擊次數(shù):2935次

人ELISA試劑盒實驗原理:

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人水痘帶狀皰疹病毒IgG(VZV-IgG)水平。用純化的人水痘帶狀皰疹病毒IgG(VZV-IgG)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入水痘帶狀皰疹病毒IgG(VZV-IgG),再與HRP 標記的水痘帶狀皰疹病毒IgG(VZV-IgG)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的水痘帶狀皰疹病毒IgG(VZV-IgG)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中人水痘帶狀皰疹病毒IgG(VZV-IgG)濃度。

人ELISA試劑盒操作步驟:

1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10 孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉,再各取50μl 分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液:將30(48T 的20 倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T 的20 倍)倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉)。

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進行。

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